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關(guān)于膠原酶ELISA試劑盒的操作步驟,您了解多少?

更新時間:2025-03-25      瀏覽次數(shù):222
  膠原酶ELISA試劑盒是一種用于檢測樣本中膠原酶濃度的試劑盒,其基于酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)原理,通過特定的抗體與膠原酶結(jié)合,形成抗原-抗體復(fù)合物,進(jìn)而通過顯色反應(yīng)來定量測定樣本中膠原酶的濃度。
  膠原酶ELISA試劑盒的檢測原理主要采用雙抗體夾心法。在預(yù)先包被有膠原酶特異性抗體的微孔板中,加入待測樣本和標(biāo)準(zhǔn)品,樣本中的膠原酶會與包被抗體結(jié)合。接著加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。經(jīng)過洗滌去除未結(jié)合的抗體后,加入底物TMB進(jìn)行顯色反應(yīng)。TMB在HRP的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化為最終的黃色。顏色的深淺與樣本中膠原酶的濃度呈正相關(guān)。最后,用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定各孔的吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本中膠原酶的濃度。
  膠原酶ELISA試劑盒的操作步驟通常包括以下幾個步驟:
  1、準(zhǔn)備試劑與樣本:將所有試劑充分混勻,避免產(chǎn)生大量泡沫。根據(jù)待測樣本數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。
  2、加樣:在標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中分別加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本。注意設(shè)置空白孔作為對照。
  3、加抗體與溫育:向各孔中加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體,用封板膜封住反應(yīng)孔,進(jìn)行溫育。
  4、洗滌:棄去液體,用洗滌液充分洗滌各孔,以去除未結(jié)合的抗體。
  5、顯色:向各孔中加入底物A、B,進(jìn)行顯色反應(yīng)。注意避光操作。
  6、終止與測定:加入終止液終止顯色反應(yīng),并在規(guī)定時間內(nèi)用酶標(biāo)儀測定各孔的OD值。
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